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說到標(biāo)準(zhǔn)品，我們先說說絕對定量：絕對定量是指在實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，對已知量的樣本進(jìn)行連續(xù)稀釋后擴(kuò)增，生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后通過與此曲線比較，定量未知樣本，絕對定量可測定靶點(diǎn)的實(shí)際拷貝數(shù)。包括以下三個(gè)步驟：

（1）將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成不同濃度，作為模板進(jìn)行擴(kuò)增；

（2）以標(biāo)準(zhǔn)品拷貝數(shù)的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，以測得的Ct值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（3）根據(jù)未知樣品的Ct值，即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線中獲得樣品的拷貝數(shù)。

以上可以看出標(biāo)準(zhǔn)品之于絕對定量是非常非常重要的，那么標(biāo)準(zhǔn)品該怎樣選擇？

在GB/T22554-2010《基于標(biāo)準(zhǔn)樣品的線性校準(zhǔn)》中注明標(biāo)準(zhǔn)樣品的組分需要與被測樣品組分一致。

標(biāo)準(zhǔn)品 既可以是含有目的基因的線性化質(zhì)粒DNA，也可以是比目的基因擴(kuò)增片段長的純化后的PCR產(chǎn)物，或者基因組DNA和cDNA，但是需要作為標(biāo)準(zhǔn)品的核酸必須保證穩(wěn)定并且需要精準(zhǔn)定量。并且由于核酸提取、逆轉(zhuǎn)錄等實(shí)驗(yàn)過程可能會影響反應(yīng)結(jié)果，所以需要注意標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)驗(yàn)步驟應(yīng)與實(shí)驗(yàn)樣品盡可能相同。常用標(biāo)準(zhǔn)品包括：

DNA標(biāo)準(zhǔn)品

純化的PCR擴(kuò)增片段或含有目的基因的克隆質(zhì)粒。

優(yōu)點(diǎn)：易制備，儲存穩(wěn)定；

缺點(diǎn)：缺少逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)過程。

RNA標(biāo)準(zhǔn)品

目的基因的體外轉(zhuǎn)錄RNA。

優(yōu)點(diǎn)：結(jié)合逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)過程；

缺點(diǎn)：制備時(shí)間長，不穩(wěn)定。

標(biāo)準(zhǔn)品的制備流程

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